CHO细胞转染大揭秘

CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）是生物制药和基础研究中zui常用的哺乳动物表达宿主之一，用于生产重组蛋白（如治疗性抗体、酶、激素等）。转染是将外源核酸（通常是质粒DNA）导入CHO细胞内的关键步骤。

以下是CHO细胞转染的常见方法、步骤和注意事项：

一、 CHO细胞主要转染方法

�化学转染：使用转染试剂（如聚合物试剂、脂质体等）帮助DNA或RNA进入细胞。这种方法的优点是操作简便，适用于常规实验。

�电转：通过电场使细胞膜暂时开放，以便DNA/RNA进入细胞。这种方法适用于准备DNA转染或大量细胞转染时。

�病毒介导转染：使用病毒载体（如腺病毒或慢病毒）将目标基因导入细胞，转染效率高，但制作过程复杂。

二、CHO细胞转染步骤

以使用中科百抗PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit为例。

适用于各种CHO细胞系，包括CHO-S、CHO-K1等。shouxuan ExpiCHO-S。PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit配合PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、PolyToolTM Expression Enhancer使用可大幅度提高重组蛋白的表达产量。

▶️材料准备：
试剂：PolyToolTM CHO Transfection Reagent、Transfection Reagent Diluent、PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、PolyToolTM Expression Enhancer；
宿主细胞（例：ExpiCHO-S，瞬转前1~2天接种，瞬转当天密度~6×106cells/mL，倍增时间~18 h；

表达质粒（例：CMV启动子驱动的Trastuzumab表达质粒，浓度1 μg/μL；

培养容器（例：125 mL摇瓶）。
▶️转染（以25mL瞬转体系为例，标准方案）
1.换液：300g离心5 min，收集ExpiCHO-S细胞，换液至37°C预热好的PolyToolTM CHO Medium中，同时调整细胞密度到6×106cells/mL。细胞摇床设定为37°C，8.0% CO2，120 rpm，80% RH（相对湿度）。
2.复合：

①取1.25 mL PolyToolTM CHO Medium（占最终表达体积的5%）稀释25μg质粒DNA（单质粒系统质量为25μg，双质粒系统总质量为25μg），轻柔混匀；

②另取1.25mL PolyToolTM CHO Medium，加入375μL室温融解的Transfection Reagent Diluent和62.5μL PolyToolTM CHO Transfection Reagent（确保总DNA与转染试剂的质量比为1:2.5），轻柔混匀；

③将转染试剂稀释液缓慢加入质粒稀释液中，立即轻柔混匀，室温孵育10 min使转染复合物充分形成（复合的时候由于特异的组装结构可能会出现浑浊现象，不影响使用效果，请放心使用）。
3.转染：从摇床中取出第1步换液培养的ExpiCHO-S，加入孵育好的DNA/PolyToolTMCHO Transfection Reagent复合物，完成转染。放回摇床继续培养。
4.转染后18-22h(Day1)：补料2mL Enhance S1（占最终表达体积的8%）、75μL Enhance S2（占最终表达体积的0.3%）和250μL Expression enhancer（占最终表达体积的1%），取样计数、测生化。
5.之后每隔三天（若表达7天则在Day4）：补料2mL Enhancer S1（占最终表达体积的8%），取样计数、测生化。
6.转染后Day7：取样计数、测生化，收获上清。

 更多请联系hth体育官方下载。